動物癥狀觀察：

表現為體重減輕、弓背豎毛，在回輸后的一個月后死亡。

實驗中涉及動物的操作程序已經得到中國醫學科學院醫學實驗動物研究所實驗動物使用與管理委員會的批準(ILAS-GC-2012-001)。

1.模型評價

1.1 行為學：

1）精準上肢運動測試

前期訓練：實驗者首先使動物消除恐懼心理，誘導動物能從實驗者手中抓取水果塊。與動物建立感情后，掛上實驗裝置，將水果塊置于食槽中央。逐步引導動物從投食處取食。

每天上、下午固定時間各進行一次。訓練期間每日喂食改為一次，每次30g，訓練結束后給與。保證飲水。訓練期間監控動物體重，根據體重調整喂食量。

數據采集：所有動物從實驗裝置中的采食狀況穩定后進行本底數據采集。方法：將蘋果切成2×2×2cm大小的正方形塊，擺放在食槽中央，每次5塊。用秒表記錄動物將5塊水果全部取走的時間。每次數據的采集在一天內完成，共5次，每次間隔2h。每次采集時，水果塊的大小、形狀及擺放位置要一致。造模后1d，3d，1w，2w，3w，4w采集實驗數據，方法和采集時間與本底數據的采集相同。比較造模前后動物左上肢抓取水果塊的時間，評價造模效果。

2）神經功能評分：造模后1d，3d，1w，2w，3w，4w使用經過修改、細化的Kito靈長類動物神經功能損害評分表對模型動物進行神經功能評分，其中意識28分，感覺系統22分，運動系統32分，骨骼肌共濟協調18分共100分。

結果：動物在麻醉蘇醒后均出現了與梗死部位相對應的神經系統定位體征。主要表現為動物蘇醒后6h內表現為有意識但情緒低落，對疼痛和聲音刺激不反抗。骨骼肌出現共濟失調。左前肢出現明顯的麻痹，不能抓握。術后3d部分動物的抓握能力有所恢復，但在采集數據的各個時間點，動物左上肢抓取水果塊的時間上均存在極顯著性差異。

1.2 影像學檢查：

1）頭顱MRI掃描：造模后24h，以后每2w一次進行MRI檢查，觀察血腫及周圍的水腫、血腫情況；儀器型號：Philips Intera Achiva 3.0T磁共振儀，8道頭部線圈。方法：將動物麻醉后固定于免磁的頭架上，放入頭部線圈內。T1掃描序列為IR，視野：120mm,TR/TE:2153ms/13/ms,層厚/間隔：3mm/0.3mm，矩陣256X256。

2）18F－FDG-PET頭顱掃描：儀器：SiemensECAT EXACT HR+ 型高分辨PET儀（32環BGO晶體，空間分辨率5mm）。造模后24小時，以后每2周一次進行PET掃描。方法：動物麻醉后從股靜脈注入 37-47MBq（1.0-1.3mCi）的 18F—FDG，30min后行PET檢查，采用3D采集模式，掃描時間10min。觀察梗死周圍能量代謝情況。

結果：MRI檢查結果可見在手術相應區域出現明顯缺損，缺損面積隨時間的推移減小。PET結果顯示右側大腦皮層梗死區代謝明顯減低。（圖3）

1.3 組織病理學檢查：造模后12h、6w、12w后分別處死動物1只、3只、3只動物，取腦組織進行固定、切片，通過H.E染色、免疫組織化學染色方法觀察梗死灶周圍的病理學改變。使用AperioGL 系統對切片進行掃描和分析。

結果：大體觀察：術后12h雙側大腦水腫，手術側較未手術側嚴重。右側大腦手術區域可見明顯梗死灶。6w、12w未見明顯水腫，仍可見明顯梗死灶。鏡下：術后12 h：腦膜血管擴張充血。軟腦膜下出血。局部腦組織（皮質）水腫，神經細胞數量減少，可見神經細胞變性壞死，毛細血管擴張充血。缺血灶最寬處面積達面積11.570mm × 3.687 mm?？梢娂t染無結構物質嵌入大腦皮層。術后6w：腦膜血管擴張充血，局部內皮細胞脫落。軟腦膜水腫。軟腦膜下大腦皮質小灶性壞死，泡沫細胞浸潤。壞死區面積3.186mm × 6.057 mm。壞死灶周圍腦組織水腫，神經細胞變性壞死。術后12w：腦膜血管擴張充血，軟腦膜下少量出血。局部大腦皮質輕度水腫。壞死區面積2.576mm × 5.377mm。

A 造模后12 h，腦組織水腫，可見明顯梗死灶

B造模后12 h，梗死灶面積達3.687mm×11.57mm。

C造模后12 h，腦組織內毛細血管擴張充血，大腦皮質局部水腫（HE×200）

D造模后12 h，神經細胞變性壞死（HE ×400）

E造模后6w，未見明顯水腫，可見明顯梗死灶

F造模后6w，梗死灶面積3.186 mm × 6.057 mm

G造模后6w，腦組織壞死，泡沫細胞浸潤（HE× 100）

H造模后6w，腦組織壞死區毛細血管內黃色結晶，泡沫細胞浸潤（HE×200）

I造模后12w，未見明顯水腫，可見明顯梗死灶

J造模后12w，梗死灶面積2.576 mm × 5.377mm

K造模后12w，腦組織壞死，泡沫細胞浸潤, 壞死區毛細血管內黃色結晶（HE× 100）

L造模后12w，神經細胞變性壞死（HE ×400）

1、模型制作

1.1術前準備：手術前12h禁食，6h禁水。氯胺酮15mg/kg對動物進行麻醉，當動物出現呼吸淺慢、角膜反射遲鈍，為麻醉適度表現。

1.2制作局部腦缺血模型：麻醉后的動物采用俯臥位固定在立體定位儀上，顱頂區備皮，常規消毒手術區皮膚，沿矢狀面在顱頂正中切開長約4 ～ 5 cm的切口，逐層分離皮下組織、帽裝肌腱、肌肉、骨膜，用擴張器充分暴露手術視野。使用便攜式顱鉆在頂骨裂處進行顱骨鉆孔，以鉆透顱骨，達硬腦膜為止（有落空感）。鉆好的孔為橢圓形，大小為3.0 cm × 1.5 cm，其長軸與顱骨正中線垂直。將冷光源發生器的發光口固定于顱頂開口處。周圍用浸透生理鹽水的無菌紗布覆蓋傷口。用鋁箔紙遮蓋動物眼睛，避免光化學反應對動物視網膜的損害。靜脈注射玫瑰紅B35 mg/kg，從注射完畢開始計時，10 min后打開光源，電子光強選擇6，機械光強選擇C，照射10 min。第一次注射后5 min第二次注射玫瑰紅B，濃度與第一次相同。第一點照射完畢后，向顳側移動光源發光口，在第二點照射10 min。照射完畢，移去光源。縫合骨膜、皮膚。 肌肉注射青霉素40萬U預防感染。

一、疾病名稱

缺血性腦卒中（Cerebralischemic stroke）

二、缺血性腦卒中簡介

缺血性腦卒中是指由于腦的供血動脈（頸動脈和椎動脈）狹窄或閉塞、腦供血不足導致的腦組織壞死的總稱。

病因：血管缺血性損傷是由于各種原因誘發腦血管栓塞引起腦組織缺血、缺氧，進一步誘發腦神經細胞變性、壞死，最終導致神經功能障礙、喪失。從缺血的影響范圍可將腦缺血分為局限性腦缺血和彌漫性腦缺血。局限性腦缺血的病因有：大腦中動脈栓塞；顱外頸內動脈或椎動脈狹窄、閉塞或血栓形成；腦動脈痙攣。彌漫性腦缺血的病因有：心搏驟停、低血壓、貧血、低血糖等。

臨床癥狀：突發的對側肢體麻木、力弱、感覺障礙、單眼黑矇、眩暈、復視、雙眼黑矇、共濟障礙等。

治療：根據分期分型對癥治療。發作頻繁者，近期內發生腦梗塞的可能性很大，應積極治療，防止發生腦梗塞。積極治療危險因素如高血壓、高血脂、心臟病、糖尿病、腦動脈硬化；預防性服用抗血小板積聚藥物；改善腦循環。